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9004-06-2  弹性酶

CAS Number:9004-06-2 基本信息
中文名:65451 弹性酶
英文名:45628 Elastase
别名: Elaszym;
Macrophage metalloelastase;
Neutrophil Elastase
分子式: C17H18O5
9004-06-2
EINECS登录号: 232-670-7
物理化学性质
性质描述:弹性酶(9004-06-2)的性状:
    本品为白色或淡灰色结晶性粉末。有吸湿性,能溶于。在pH4~10.5及2℃时稳定,pH>6时可延长稳定时间。冰冻干粉在5℃下可保存3~12个月。分子量为25900,等电点为pH=9.5。

    纯胰弹性蛋白酶由240个氨基残基组成单一肽链,分子内有4对二键。肽链走向和空间构型与糜蛋白酶极为相似,在pH5时分子呈球形,分子内有两个α-螺旋区。它是一种单纯蛋白酶,不含辅基和属离子,也无变构中心,其活力取决于特异的三维结构。活性中心氨基酸残基为:组45·天93·丝88,其反应性丝氨酸附近的氨基酸残基排列顺序为:一甘·天·丝·甘一。

    本品除水解弹性蛋白外还可水解血红蛋白、血纤蛋白,对毛发蛋白不起作用。许多抑制剂能使本品活力降低或消失,如10-5mol·L-1硫酸铜、7×10-2mol·L-1氯化钠可抑制50%酶活力,氰化钠硫酸铵氯化钾、三也有类似作用,一般多为可逆的,大豆胰蛋白酶抑制剂、血清或肠内非透析物等也有抑制作用。其他如硫代苹果酸、巯基琥珀酸、二异丙基氟代磷酸等均能强烈抑制酶活力。
其他信息
产品应用:调节血脂。
生产方法及其他:1.弹性酶(9004-06-2)的制备:
    (1)脱火、洗脂、干燥:
    新鲜或冷冻猪胰,投入绞肉机中绞梳,加3倍量冷却至0℃以下的丙酮,在不断搅拌下于0℃左右脱水1h,离心(废丙酮回收处理),分离沉淀,湿饼续加3倍量的冷丙酮,同以上操作,湿饼置真空干燥箱中干燥,粉碎,即得丙酮干粉。低温密闭保存,备用。

    粉碎猪胰脏丙酮(冷)→脱水;脱脂;干燥丙酮粉

    (2)提取:
    取丙酮干粉按丙酮粉重量加入一定量的水,使其重量体积比为5%,在不断搅拌下于20~25℃提取2h,提取物过滤时加入少量滑石粉以助滤在20℃以下,棉纶布自然过滤或板框压滤,得澄清提取液。

    丙酮粉水:20℃→提取提取液

    (3)吸附:
    提取液中加入一定量蒸馏水稀释至2~3倍,加到用ph6.4磷酸缓冲液(0.1mol/L)平衡过的Amberlite CG-50树脂m(原料):m(树脂)=1:2,在不断搅拌下,20~25℃吸附2h,收集树脂,用蒸馏水漂洗树脂直至洗脱液无色为止,得吸附物。

    提取液Amberliet CG-50树脂→吸附吸附物

    (4)洗脱:
    每1份的吸附树脂加入1.5倍ph9.3氯化铵缓冲液(0.5mol/L),在不断搅拌下,洗脱1h,分离树脂,洗脱液以乙酸(2mol/L)调节ph至中性,过滤,得澄明洗脱液。

    吸附物ph9.3缓冲液→洗脱洗脱液

    (5)沉淀在-5℃下,边搅拌边在洗脱液中加入3倍已冷却到-5℃丙酮,继续搅拌10min,于-5℃静置沉定数小时。

    洗脱液丙酮;-5℃→沉淀沉淀

    (6)脱水、干燥收集沉淀 ,用丙酮洗涤3次,再用乙醚洗涤3次,真空干燥,得弹性酶原粉。

    沉淀丙酮;乙醚→脱水;干燥弹性酶原粉

2.制剂:
    弹性酶冻干针剂:15mg/支;肠溶片:10mg(200u)/片;肠溶胶囊:6mg/粒;肠溶丸:10mg/丸。

    复方弹性酶软膏为含本品和硫酸新霉素的白色软膏。质量标准如下。

    上海市药品标准1993年版

    指标名称                              指标
    含量:(1)弹性酶,%               0.25或0.50
          (2)硫酸新霉素,u/kg             600万
    其他                    符合软膏剂有关规定

3.弹性酶(9004-06-2)用法及剂量:
    临床用于:
    (1)高脂血症:肠溶胶囊,每次6mg。肠溶片,每次10~20mg,每日3次。或粉针剂,肌内注射,每日15mg,3个月为一疗程;
    (2)慢性支气管炎:肠溶胶囊,每次12mg,每日3次,一个月为一疗程。
    (3)动脉粥样硬化、高血压、脂肪肝:剂量同高脂血症。

4.不良反应和注意事项:
    偶有过敏和轻度胃肠症状,出现腹胀、食欲不振、肝区痛、口干、嘴唇发麻。无需治疗,能自愈。

5.贮藏:
    遮光密闭2℃以下保存。

6.药效学:
    本品系由胰脏提取或由微生物经发酵而制得的能溶解弹性蛋白的酶,由240个氨基酸组成的多肽,分子量为25900。本品能影响脂代谢,阻止胆固在体内的合成并促进其转化为胆汁酸,从而降低血清胆固醇,并有防止动脉粥样硬化及抗脂肪肝作用。此外还有促进血凝、加强子宫收缩等作用。

7.鉴别:
    取效价测定项下的供试品溶液2ml,加刚果红-弹性蛋白20mg,硼酸盐缓冲液[取硼酸0.496g与硼砂1.146g,加水溶解并稀释成1000ml,调节pH值至8.8]5ml,置37℃水浴中,充分振摇10分钟后离心,上清液应显红色。

8.检查:
    (1)干燥失重:取本品0.2g,以五氧化二磷为干燥剂,在60℃减压干燥4小时,减失重量不得过8.0%。
    (2)炽灼残渣:取本品0.4g,依法检查,遗留残渣应不得过2.0%。
    (3)重金属 取炽灼残渣项下遗留的残渣,依法检查,含重金属不得过百万分之二十五。

9.效价测定:
    刚果红-弹性蛋白溶液的制备:取刚果红-弹性蛋白100mg,精密称定,置100ml量瓶中,加本品的溶液(称取本品适量,置研钵中,按制备供试品溶液的方法,制成每1ml中含本品约40单位的溶液)20ml,置37℃水浴中,不断振摇至刚果红-弹性蛋白全部溶解,加入磷酸盐缓冲液[取磷酸二氢钠42.3g及磷酸氢二钠51.2g,加水溶解并稀释成1000ml,调节pH值至6.0]50ml,并用硼酸盐缓冲液(pH8.8)稀释至刻度。

  供试品溶液的制备:取本品约0.1g,精密称定,置研钵中,先加预冷至10℃以下的硼酸盐缓冲液(pH8.8)约2ml,研磨均匀,再滴加1mol/ml氢氧化钠溶液约4滴,研磨约20秒,使溶解,立即加入预冷至10℃以下的硼酸盐缓冲液(pH8.8)稀释,移至100ml量瓶中,并稀释至刻度。精密吸取适量,用硼酸盐缓冲液(pH8.8)稀释成每1ml中约含本品4~6单位的溶液。

  标准曲线的制备:精密量取刚果红-弹性蛋白溶液0、2.0、4.0、6.0、8.0与10.0ml,分别置10ml量瓶中,各加硼酸盐缓冲液(pH8.8)和磷酸盐缓冲液(pH6.0)的等量混合液至刻度。以零管为空白,照分光光度法。在495nm的波长处测定吸收度,以刚果红-弹性蛋白量为横座标,吸收度为纵坐标,绘制标准曲线。

  测定法:取直径约20mm的试管3支,分别加入刚果红-弹性蛋白20mg及硼酸盐缓冲液(pH8.8)3.0ml,置37℃水浴中预热10分钟,依次在第一管加硼酸盐缓冲液(pH8.8)2.0ml,第二、三管各精密加入预热到37℃的供试品溶液2ml,立即计时,置37℃水浴连续振摇20分钟(准确计时),立即加入磷酸盐缓冲液(pH6.0)5.0ml,混匀,以2500转/分,离心20分钟。精密吸取上清液2ml,加硼酸盐缓冲液(pH8.8)和磷酸盐缓冲液(pH6.0)的等量混合液2.0ml,摇匀,以第一管为空白,照分光光度法在495nm的波长处测定吸收度,从标准曲线上查得相应的刚果红-弹性蛋白量,按单位定义折算成单位数,计算本品的单位。

  在上述条件下,20分钟水解1mg刚果红-弹性蛋白所需的酶量为一个本品的单位。

10.处理:
    通常对水是稍微危害的,不要将未稀释或大量产品接触地下水,水道或者污水系统。若无政府许可,勿将材料排入周围环境。

11.其他:
    ①疏水参数计算参考值(XlogP):-2.9;
    ②氢键供体数量:2;
    ③氢键受体数量:5;
    ④可旋转化学键数量:3;
    ⑤互变异构体数量:8;
    ⑥拓扑分子极性表面积(TPSA):68.2。
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