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61512-21-8  胸腺素F5

CAS Number:61512-21-8 基本信息
中文名:84518 胸腺素F5
英文名:64694 Thymosin α1
别名: THYMOSIN FROM BOVINE THYMUS);
thymosin-F5
分子式: C127H214O56N33
61512-21-8
物理化学性质
性质描述:本品系小牛、猪胸腺提取得到的一类重要激素。国外主要用胸腺素组分5, 含有多种多肽,相对分子质量为1000-15000。我国用的猪胸腺素组分5是等电点为3.5-9.5的不同蛋白质组成的混合物,相对分子质量在15000以下。
胸腺素组分5具有免疫活性,具体含有胸腺素α1、胸腺素α5、胸腺素α7、胸腺素β3和胸腺素β4等活性成分,主要作用是促进T细胞分化成熟,诱导前T细胞(淋巴干细胞)转化为T细胞,并进而分化成为具有各种特殊功能的T细胞亚群,增加和调整机体的免疫功能。胸腺素对热稳定,短时间内加热至80℃,生物活性不降低。
其他信息
产品应用:免疫增强剂。治疗胸腺发育不全综合征、运动失调性毛细血管扩张症等免疫缺陷性疾病。国内用于治疗复发性口疮、麻风重症感染等伴有免疫功能低下的患者。
不良反应:少数人服用后出现荨麻疹、皮疹等局部过敏反应,偶见头昏发热等全身过敏反应。注射前应做皮试。
生产方法及其他:方法一、从猪胸腺提取
提取、去杂蛋白 将猪胸腺(新鲜或冰冻)绞碎,提取两次。每次加入2倍量性生理盐,调pH约3,10℃以下提取4h, 纱布过滤。合并两次滤液,调pH7左右,水浴80℃保持10min, 冷至10℃以下过滤或离心, 得提取液。加入冷丙酮约5倍量,静置4h, 收集沉淀, 用丙酮、乙醚脱水, 得淡黄色丙酮粉。猪胸腺[酸性生理盐水]→[pH3, 4h×2, 10℃]滤液→[pH7; 80℃]提取液[冷丙酮]→[4h]丙酮粉
丙酮沉淀、去杂蛋白、盐析 将丙酮粉加入pH7、0.01mol/L CPB去杂蛋白。第一次加入CPB 6倍量体积, 搅拌0.5h, 离心,残渣再加入4倍体积的CPB操作一次。 合并两次清液, 加硫酸铵达25%饱和度, 调pH7, 静置数小时,离心去沉淀。上清液调pH4.6, 加硫酸铵达50%饱和,搅拌0.5h, 冰箱中静置数小时,离心收集沉淀。
丙酮粉[CPB]→[pH7]清液[(NH4)2SO425%饱和度]→[pH7]上清液[(NH4)SO4 50%饱和度]→[pH4.6]盐析物
透析去盐、层析分离 将盐析物中加入5倍量蒸馏水,调pH为7。先将冷蒸馏水透析至无酸根离子, 再对pH7、0.01mol/L CPB透析10h, 透析液离心得上清液。用EDTA-离子交换纤维素柱在pH6-7交换,用pH4、0.02mol/L CPB洗脱, 加冷丙酮沉淀,3号垂熔漏斗过滤,得丙酮粉。

去热原、无菌灌封 将丙酮粉溶于无热原蒸馏水, 用1mol/L盐酸调pH6, 加等量乙醚剧烈搅拌1h, 1500r/min离心15min,吸出中层清液,清液以等量乙醚同法洗两次,合并清液加入5倍量丙酮,析出沉淀,得丙酮干粉。测定热原,配制含胸腺素2.5 mg/ml, pH6-7.5, 无菌灌装得淡黄色胸腺素注射液。
丙酮粉[蒸馏水,乙醚]→[pH6]无热原粉[无菌灌装]→[pH6-7.5]胸腺素注射液
方法二、从小牛胸腺中提取
提取、过滤 将小牛胸腺绞碎后,加0.5%正辛-0.9%氯化钠溶液约3倍量(V/V)进行匀浆,然后1500r/min 离心30min, 上清液用纱布过滤得滤液。
小牛胸腺[0.5%正辛醇-0.9%NaCl]→[离心]上清液[纱布过滤]→滤液
去杂蛋白 将滤液加热至80℃ 15min, 冷却后1500r/min离心30min, 除杂蛋白,得上清液。然后加(NH4)2SO4达25%饱和度时,纸浆抽滤,得滤液。
上清液[80℃, 15min]→[离心]上清液[(NH4)2SO4]→[纸浆抽滤]滤液
盐析、层析分离 滤液用20%的醋酸调pH值4.0, 加(NH4)2SO4达50%饱和度, 1500×g离心30min, 得沉淀。用-15℃丙酮洗涤至白色粉末,真空抽干丙酮。粉末溶于0.1mol/L、pH8.4Tris-盐酸溶液中,4000×g 离心30min, 得上清液。
滤液[醋酸,(NH4)2SO4]→[pH4.0 离心]沉淀[0.1 mol/L Tris-盐酸]→[pH8.4]上清液
脱盐 上清液过Sephadex G-150柱脱盐,以pH8.4磷酸盐缓冲液(0.02 mol/L)洗脱,再过Sephadex G-25柱脱盐,用蒸馏水洗脱,收集活性峰,冷冻干燥即得胸腺素。
上清液[Sephadex G-150柱]→洗脱液[Sephadex G-25柱]→胸腺素。
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